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猪肉中克伦特罗的检测
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猪肉中克伦特罗的检测
《农产品/食品快速检测技术》课程-微设计 微课编号 W1205 微课名称 检测猪肉中克伦特罗 所属模块 残留物的快速检测 子模块 兴奋剂类药物残留的快速检测 关键词 样品处理；猪肉；克伦特罗 是否通用 √ √通用
农产品
食品 是否重点建设 √是
否 微课类型 实验实训型 微课形式 混合拍摄式 教学设计模式 直观演示法
教学目标 了解 ELISA 试剂盒（克伦特罗残留检测）的使用； 掌握酶联免疫分析的步骤和方法； 学会使用食品分析仪。
教学内容 知识点 技能点 1、酶联免疫分析的要点； 2、食品分析仪的操作方法。
1、酶联免疫分析的步骤及规范操作； 2、食品分析仪的操作规范；
设计思路 教学步骤 呈现形式与素材 时长(min) 1、由上一次课引入本次课的内容，介绍 ELISA 试剂盒（克伦特罗残留检测）的使用； 动画 1 2、真人示范酶联免疫分析的规范操作，视频中强调酶联免疫分析的步骤及规范操作（技能点 1），介绍酶联免疫分析的要点（知识点 1）； 真人操作视频 10.5 3、真人示范食品分析仪的规范操作，视频中强调食品分析仪的操作步骤及规范（技能点 2），介绍食品分析仪的操作方法（知识点 2）； 真人操作视频 2.5 4、结果判读； 视频 0.5 小计 14.5 PBL 讨论 为什么标准品/样品、酶标二抗工作液、抗体工作液的加样顺序不能颠倒？
设计者 陈晶，上海农林职业技术学院 顾欣，上海市兽药饲料检测所 版本号 （01）2016.03 附 ：
1、微课类型（限填项）：讲授型、实验实训型、答疑型、总结型、其它；
2、微课形式：画中画式、讲坛式、录播教室实录式、讨论式、访谈式、实地拍摄式、可汗学院式、PPT 动画式、Prezi 动画式、二维动画式、三维动画式、虚拟抠像式、混合拍摄式、师生形象的处理、混合拍摄式等（可参考给的学习资料），应根据课程的特点，选用丰富的形式； 3、微课教学设计模式：讲授法、直观演示法、任务驱动法、讨论法、案例分析法、角色扮演法等；
猪肉中克伦特罗的检测
盐酸克伦特罗快速检测 摘
要 本实验采用了百睿 TM 盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为 3ng/mL（3ppb）。
关键词
盐酸克伦特罗快速检测卡
定性
检出限
前
言
盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为 C12H18Cl2N2O•HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的 B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的 5~10 倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在 养 猪 业 中 一 些 非 法 使 用 者 将 其 作 为 一 种 生 长 促 进 剂 添 加 到 饲 料 中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1 号文 5 关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知 6 中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。
1 实验步骤 （1）
使用前将待测样本溶液恢复至室温 （2）
取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液 100ul，垂直加于加样孔，开始计时 （3）
结果应在 3~5min 读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
【 结
2 实 酸克 3 结3.1罗金伦特复合结 果判断】
实验结果 实验结果由图可知克伦特罗；结果与讨论实验原理 若待测样金标单抗在特罗-BSA 偶合物,并在该
果如下图 1 知，左边表右边样品中论 样品溶液中不在硝酸纤维素偶联物拦截形该印迹处形
表示样品中盐中盐酸克伦不含盐酸克素膜上层析形成盐酸克形成红色的条
盐酸克伦特伦特罗浓度高克伦特罗,当析泳动,被硝克伦特罗-BS条带(检测
特罗浓度低于高于 3 ng/m当样品溶液硝酸纤维素膜SA 偶联物)线);测试端阴性（- ）：两盐酸克伦特罗阳性（+ ）：检酸克伦特罗浓无效：未出现或检测卡已失
于 3 ng/mLmL。
进入测试端膜上检测印金标盐酸克端多余的金条紫红色条带浓度低于 3 ng/测 T 线无显色度高于 3 ng/m质控 C 线，表效。
L，或不含有端,盐酸克伦印迹处的盐酸克伦特罗单金标盐酸克伦带出现。表示样g/mL，或不含有色，则表示样品mL。
表明操作过程不有盐伦特酸克单抗 伦特样品中有。
品中盐不正确
罗单成红克伦伦特物捕浅的根据线颜3.2单抗在硝酸红色的对照伦特罗与盐特罗-BSA 偶捕获盐酸克的红色印迹据该反应模颜色越浅表 试纸条组酸纤维素膜上照条带(对照盐酸克伦特罗偶联物形成克伦特罗金标迹,多余的盒模式,检测线表示样品中盐组成 上继续层析照线)。当待罗金标单抗成竞争,抑制标单抗的量盒标盐酸克伦线颜色深浅与盐酸克伦特析可被对照印待测尿样中含抗形成复合物制了检测印迹量,而不能在伦特罗单抗与样品中盐特罗含量越高印迹羊抗鼠含有一定量物,从而与硝迹处包被的在检测线形成抗继续层析在盐酸克伦特高。
鼠 IgG 单克量的盐酸克伦硝酸纤维素的盐酸克伦特成红色印迹在对照印迹罗含量呈负克隆抗体捕获伦特罗时,盐素膜上的盐酸特罗-BSA 偶迹或形成颜色迹处形成对照负相关,即检获形盐酸酸克偶联色较照线。检测
1. 样品垫的作用是尽快地将加样孔中的样品吸附到试纸中去，以利于继续加样； 2. 结合垫中则是含有胶体金标记的盐酸克伦特罗单抗； 3. 硝酸纤维素膜上则预先标记了两种物质，在检测线处标记的是盐酸克伦特罗-BSA 偶联物。
4. 吸收垫一般由吸水纸构成，主要作用是保持从加样垫到吸收垫之间的毛细管作用力[1] 。
参考文献
参考文献
[1] 姜艳彬，孙冠如，王海，等. 盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制[J]. 中国畜牧兽医. 2010(10): 109-113.
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